吳彥祖出生于1974年，父親是電氣工程師，從事計劃核電站，母親是大學生理學傳授。他自己則畢業(yè)于美國俄勒岡大學修建系，并得到修建副修獎學金。1997年在姐姐的勉勵下開始當模特，被《美少年之戀》導演楊凡看中，苦口婆心之下同意出演首部電影。

首部電影之后，相繼與成龍、舒淇、王祖賢、楊千嬅等合作出演多部影戲，2002年后漸入佳境，多次提名香港電影金像獎，2005年因出演《新警員故事》中邪魅狂狷的反派關祖斬獲第41屆臺灣影戲金馬獎最佳男配角。

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